пеницилламин
C5H11NO2S 149,21
д-Валин, 3-меркапто-.
d-3-Меркаптовалин [52-67-5].
» Пеницилламин содержит не менее 97,0 и не более 102,0 процентов C5H11NO2S в пересчете на сухое вещество.
Упаковка и хранение- Консервируйте в плотных контейнерах.
Справочные стандарты USP<11>-
USP Пеницилламин RS
USP Пенициллин G Калий RS
USP дисульфид пеницилламина RS
C10H20N2O4S2
Идентификация-
A: Инфракрасное поглощение<197M> (50 мг в 300 мг).
Б: Растворите 10 мг в 5 мл воды и добавьте 1 каплю 5 N гидроксида натрия и 20 мг нингидрина: сразу же образуется синий или фиолетово-синий цвет.
C: Растворите 20 мг в 4 мл воды, добавьте 2 мл раствора фосфорновольфрамовой кислоты (1 из 10) и нагрейте почти до кипения: сразу же образуется темно-синяя окраска.
Удельное вращение<781S>: между 60,5 и 64,5.
Тестовый раствор: 50 мг на мл в 1,0 N гидроксиде натрия.
pH<791>: от 4,5 до 5,5, в растворе (1 из 100).
Потери при сушке<731>- Около 100 мг, точно взвешивая, высушивают в капилляре с притертой пробкой в ​​вакууме при давлении не более 5 мм рт. ст. при 60°С в течение 3 часов: теряет не более 0,5% своей массы.
Остаток при прокаливании<281>: не более 0,1%, обугленный остаток смачивают 2 мл азотной кислоты и 5 каплями серной кислоты.
Тяжелые металлы, Метод II<231>: не более 0,002%.
Предел активности пенициллина-
Буфер pH 2,5 - 100 г одноосновного фосфата калия растворяют в воде, добавляют 0,2 мл соляной кислоты, доводят водой до 1000 мл и перемешивают. При необходимости доведите pH до 2,5 с помощью фосфорной кислоты или 10 N гидроксида калия.
Стандартная подготовка- Приготовьте раствор в соответствии с указаниями для пенициллина G, указанными в Таблице 1 раздела «Антибиотики-Микробные анализы» 81, за исключением того, что нужно приготовить окончательный исходный раствор, содержащий 100 единиц пенициллина G на мл и шесть тестовых разведений в диапазоне от 0,005 единицы пенициллина G на мл до 0,2 единицы пенициллина G на мл, и использовать среднюю дозу стандарта 0,050 единиц пенициллина G на мл.
Подготовка к экзаменам- Растворите 1,0 г в воде, чтобы получить 18,0 мл, перенесите 9,0 мл этого раствора в сепаратор, добавьте 20 мл амилацетата и 1 мл буфера с pH 2,5 и встряхните. Дают слоям разделиться и отводят водный слой во второй сепаратор, сохраняя экстракт амилацетата в первом сепараторе. Проверьте pH водного слоя и, если он больше 3,0, доведите его с помощью соляной кислоты до pH 2,5 и экстрагируйте 20 мл амилацетата. Отбросьте водный слой и добавьте экстракт амилацетата в первый сепаратор. Промойте объединенные экстракты амилацетата 10 мл разбавленного буфера с pH 2,5 (1 к 10) и отбросьте водный слой. Экстрагируйте амилацетат с помощью 10,0 мл буфера № 1 (см. «Фосфатные буферы и другие растворы» в разделе «Среды и разбавители в разделе «Антибиотики — микробные анализы» 81). Используйте часть буферного экстракта в качестве тестового раствора А. К порции экстракта объемом 5 мл добавьте 0,1 мл раствора пенициллиназы и инкубируйте при температуре от 36 до 37,5 в течение 60 минут (тестовый раствор Б).
Приготовление инокулята- Приготовьте, как указано в разделе «Антибиотики-Микробные анализы 81», используя Micrococcus luteus (ATCC 9341) в качестве тест-организма и инокулят, который дает четкие резкие зоны ингибирования диаметром от 17 до 21 мм при среднем уровне дозы стандарта.
Процедура- Действуйте, как указано для метода «цилиндр-планшет» в разделе «Антибиотики-микробные анализы» 81, используя 10 мл среды 1 для базового слоя и 4 мл инокулированной среды 4 для семенного слоя и инкубируя планшеты с 29 по 31, за исключением того, что на каждом тестовом планшете нужно заполнить 2 цилиндра тест-раствором А, 2 цилиндра тест-раствором B и 2 цилиндра средней дозой стандарта. Если тестовый раствор А не дает зоны ингибирования, тест на пенициллин отрицательный. Если испытуемый раствор А образует зону ингибирования, а испытуемый раствор В — нет, пенициллин присутствует. Определите его уровень по стандартной кривой: в каждом мл исследуемого раствора А содержится не более 0,01 Г ЕД пенициллина (0,2 Г ЕД пенициллина на г).
Меркурий-
[примечание-Дитизонат ртути светочувствителен. Выполните этот тест при приглушенном свете.]
Маточный раствор дитизона - Растворите 40 мг дитизона в 1000 мл хлороформа.
Титрант дитизона- Разбавьте 30,0 мл исходного раствора дитизона хлороформом до 100,0 мл. Этот раствор содержит примерно 12 мг дитизона на л.
Стандартное решение- 135,4 мг хлорида сулемы переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 0,25 н серной кислоты до нужного объема и перемешивают. Этот раствор содержит эквивалент 100 мг Hg в 100 мл.
Разбавленный стандартный раствор - Внесите 2 мл стандартного раствора пипеткой в ​​мерную колбу вместимостью 100 мл, добавьте 0,25 N серной кислоты до нужного объема и перемешайте. Каждый мл этого раствора содержит эквивалент 20 мкг ртути.
Стандартизация- Внесите пипеткой 1 мл разбавленного стандартного раствора в сепаратор объемом 250 мл и добавьте 100 мл 0,25 N серной кислоты, 90 мл воды и 10 мл раствора гидрохлорида гидроксиламина (1 к 5). Затем добавьте 1 мл раствора динатрия эдетата (1 из 50), 1 мл ледяной уксусной кислоты и 5 мл хлороформа, встряхивайте в течение 1 минуты, дайте отделиться и выбросьте слой хлороформа. К раствору добавляют титрант дитизона порциями по 0,3–0,5 мл из бюретки емкостью 10 мл. После каждого добавления смесь встряхивают 20 раз, дают слою хлороформа отделиться и выбрасывают его. Продолжайте до тех пор, пока добавленный титрант дитизона не станет зеленым после встряхивания. Рассчитайте количество ртути в мкг, эквивалентное 1 мл титранта дитизона, разделив 20 на количество мл добавленного титранта дитизона.
Процедура- Перенесите 500 мг пеницилламина в колбу Кьельдаля емкостью 650 мл, содержащую несколько стеклянных шариков, наклоните колбу под углом около 45° и добавьте 2,5 мл азотной кислоты через небольшую воронку, помещенную в горлышко колбы. Оставьте смесь при комнатной температуре до тех пор, пока не начнут выделяться пары закиси азота и не утихнет бурная реакция (от 5 до 30 минут). Добавьте через воронку 2,5 мл серной кислоты и нагрейте сначала осторожно, а затем до образования паров триоксида серы, затем охладите. Осторожно добавьте 2,5 мл азотной кислоты, снова нагрейте до образования паров триоксида серы и охладите. Повторяют обработку азотной кислотой и нагревают, затем охлаждают и осторожно добавляют 50 мл воды, промывая воронку и собирая смывы в колбу. Снимите воронку, уварите раствор примерно до половины его объема (около 25 мл) и остудите до комнатной температуры. Перенесите в сепаратор емкостью 250 мл с помощью воды и добавьте воду, чтобы получить примерно 50 мл. Добавляют 1 мл раствора динатрия эдетата (1 из 50) и 1 мл ледяной уксусной кислоты и экстрагируют небольшими порциями хлороформа до тех пор, пока последний хлороформный экстракт не станет бесцветным. Выбросьте экстракт хлороформа и добавьте 50 мл 0,25 N серной кислоты, 90 мл воды и 10 мл раствора гидрохлорида гидроксиламина (1 из 5). Добавьте титрант дитизона порциями от 0,3 до 0,5 мл из бюретки емкостью 10 мл. После каждого добавления смесь встряхивают 20 раз, дают слою хлороформа отделиться и выбрасывают его. Продолжайте до тех пор, пока добавленный титрант дитизона не станет зеленым после встряхивания. Рассчитайте количество присутствующей ртути: предел — 10 мкг (0,002%).
Предел дисульфида пеницилламина -
Разбавитель, подвижная фаза и раствор для разделения - Приготовьте, как указано в анализе.
Стандартная подготовка- Растворите точно взвешенное количество дисульфида пеницилламина USP RS в разбавителе, чтобы получить раствор с известной концентрацией около 0,025 мг на мл.
Подготовка к экзаменам- Используйте препарат для анализа.
Хроматографическая система- Действуйте, как указано в анализе. Хроматографируйте стандартный препарат и записывайте реакции пика дисульфида пеницилламина, как указано в процедуре: относительное стандартное отклонение для повторных инъекций составляет не более 2,0%.
Процедура- [примечание-Используйте области пиков там, где указаны реакции пиков.] Отдельно введите равные объемы (около 20 мкл) стандартного препарата и тестируемого препарата в хроматограф, запишите хроматограммы и измерьте ответы для пиков дисульфида пеницилламина. Рассчитайте процентное содержание дисульфида пеницилламина (C10H20N2O4S2) в пеницилламине, взятом по формуле:
100(КС/КУ)(РУ/РС)
где CS — концентрация, в мг на мл, USP дисульфида пеницилламина RS в стандартном препарате, CU — концентрация, в мг на мл, пеницилламина в тестируемом препарате, а rU и rS — пиковые реакции дисульфида пеницилламина, полученные для тестируемого препарата и стандартного препарата, соответственно: обнаружено не более 1,0% дисульфида пеницилламина.
анализ-
Разбавитель- Растворите 1,0 г динатрия эдетата в воде, чтобы получить 1000 мл раствора.
Подвижная фаза- Растворите 6,9 г одноосновного фосфата натрия и 0,20 г 1-гексансульфоната натрия в воде, чтобы получить 1000 мл раствора. Доведите pH фосфорной кислотой до 3,0 ± 0,1 и профильтруйте через подходящий фильтр с порами 1 мкм или более мелкой. При необходимости внесите коррективы (см. «Пригодность системы» в разделе «Хроматография<621>»).
Решение по разрешению - Приготовьте раствор в разбавителе, содержащем около 1 мг пеницилламина USP RS и 0,1 мг дисульфида пеницилламина USP на мл.
Стандартная подготовка- Растворите точно взвешенное количество пеницилламина USP RS в разбавителе, чтобы получить раствор с концентрацией около 1,25 мг на мл.
Подготовка к анализам- Перенесите примерно 125 мг пеницилламина (точно взвешенного) в мерную колбу емкостью 100 мл, растворите и разбавьте разбавителем до объема и перемешайте.
Хроматографическая система (см. Хроматография<621>)-Жидкостный хроматограф оснащен детектором 210-нм и колонкой размером 3,9-мм × 30-см, содержащей насадку L1. Скорость потока составляет около 1,6 мл в минуту. Хроматографируйте раствор разрешения и записывайте ответы, как указано в процедуре: относительное время удерживания составляет около 0,7 для пеницилламина и 1,0 для дисульфида пеницилламина, а разрешение R между пиком пеницилламина и пиком дисульфида пеницилламина составляет не менее 3,0. Хроматографируйте стандартный препарат и записывайте ответы, как указано в процедуре: относительное стандартное отклонение для повторных инъекций составляет не более 1,0%.
Процедура- [примечание-Используйте области пиков там, где указаны пиковые отклики. ] Отдельно введите в хроматограф равные объемы (около 20 мкл) стандартного препарата и препарата для анализа, запишите хроматограммы и измерьте отклики основных пиков. Рассчитайте количество пеницилламина (C5H11NO2S) в взятой порции пеницилламина, в мг, по формуле:
100С(РУ/РС)
где C — концентрация пеницилламина RS в мг на мл в стандартном препарате, а rU и rS — пиковые реакции пеницилламина, полученные для анализа и стандартного препарата соответственно.