ГЕНТАМИЦИНА СУЛЬФАТ
[1405-41-0]
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Смесь сульфатов противомикробных веществ, продуцируемых Micromonospora purpurea, основными компонентами которых являются гентамицины С1, С1а, С2, С2а и С2b.
Содержание: минимум 590 МЕ/мг (безводное вещество).
ПЕРСОНАЖИ
Внешний вид: белый или почти белый, гигроскопичный порошок.
Растворимость: свободно растворим в воде, практически нерастворим в этаноле (96%).
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
Первая идентификация: B, C.
Вторая идентификация: А, С.
А. Тонкослойная хроматография (2.2.27).
Тестовое решение. 25 мг исследуемого вещества растворяют в воде Р и доводят до 5 мл тем же растворителем.
Эталонное решение. Содержимое флакона гентамицина сульфата CRS растворяют в воде Р и доводят до 5 мл тем же растворителем.
Пластина: пластина с силикагелем для ТСХ R.
Подвижная фаза: нижний слой смеси равных объемов аммиака концентрированного Р, метанола Р и хлористого метилена Р.
Применение: 10 мкл.
Развитие: более 2/3 пластинки.
Сушка: на воздухе.
Обнаружение: распылить раствор нингидрина R1 и нагревать при 110 ℃ в течение 5 минут.
Результаты: 3 основных пятна на хроматограмме, полученной с использованием тестируемого раствора, аналогичны по положению, цвету и размеру 3 основным пятнам на хроматограмме, полученной с использованием эталонного раствора.
Б. Изучите хроматограммы, полученные при тесте на состав.
Результаты: хроматограмма, полученная с тестируемым раствором (b), показывает 5 основных пиков, имеющих то же время удерживания, что и 5 основных пиков на хроматограмме, полученной с помощью эталонного раствора (a).
C. Дает реакцию (а) сульфатов (2.3.1).
ИСПЫТАНИЯ
Раствор S. Растворить 0,8 г в воде, свободной от диоксида углерода R, и разбавить до 20 мл тем же растворителем.
Внешний вид раствора. Раствор S является прозрачным (2.2.1) и окрашен не более интенсивно, чем интенсивность 6 диапазона эталонных растворов наиболее подходящего цвета (2.2.2, Метод II).
pH (2.2.3): от 3,5 до 5,5 для раствора S.
Удельное оптическое вращение (2.2.7): от +107 до +121 (безводное вещество).
2,5 г растворяют в воде Р и доводят до 25,0 мл тем же растворителем.
Состав. Жидкостная хроматография (2.2.29): используйте процедуру нормализации, принимая во внимание только пики гентамицинов C1, C1a, C2, C2a и C2b.
Тестовое решение (а). 25,0 мг исследуемого вещества растворяют в подвижной фазе и доводят до объема 25,0 мл подвижной фазой.
Тестовое решение (б). Разбавьте 5,0 мл тестируемого раствора (а) до 25,0 мл подвижной фазой.
Эталонный раствор (а). Растворите 5 мг гентамицина для идентификации пика CRS (содержащего примесь B) в подвижной фазе и разбавьте до 25 мл подвижной фазой.
Эталонный раствор (б). Растворите 20,0 мг сульфата сизомицина CRS (примесь А) в подвижной фазе и разбавьте до 20,0 мл подвижной фазой.
Эталонный раствор (c). Разбавьте 1,0 мл эталонного раствора (b) до 100,0 мл подвижной фазой.
Эталонный раствор (d). К 1 мл эталонного раствора (b) добавьте 5 мл тестируемого раствора (a) и разбавьте до 50 мл подвижной фазой.
Колонка:
- размер: l = 0,25 м, Ø = 4,6 мм;
- неподвижная фаза: октадецилсилилсиликагель для хроматографии Р (5 мкм);
- температура: 35℃.
Мобильная фаза. К 900 мл углекислоты - свободной воды Р добавляют 7,0 мл трифторуксусной кислоты Р, 250,0 мкл пентафторпропановой кислоты Р и 4,0 мл карбоната - свободной
раствор гидроксида натрия Р, дайте уравновеситься и доведите pH до 2,6, используя раствор гидроксида натрия без карбоната Р, разбавленный от 1 до 25. Добавьте 15 мл ацетонитрила Р и разбавьте до
1000,0 мл с углекислым газом-свободной водой Р.
Скорость потока: 1,0 мл/мин.
Раствор после колонки: раствор гидроксида натрия, не содержащий карбоната-R, разбавленный в соотношении 1 к 25, предварительно дегазированный, который без импульсов добавляется в выходящие потоки колонки с использованием полимерного смесительного змеевика емкостью 375 мкл.
Скорость потока постколоночного раствора: 0,3 мл/мин.