Глутатион
С10Х17Н3О6С 307.32
Пентановая кислота, 2-амино-5-[(R)-1-(карбоксиметиламино)-3-меркапто-1-оксопропан-2-иламино]-5-оксо, (S);
N-(N-l--Глутамил-l-цистеинил)глицин [70-18-8].
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Глутатион содержит не более 98,0% и не более 101,0% C10H17N3O6S в пересчете на глутатион в пересчете на сухое вещество.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
• А. Инфракрасное поглощение<197K>
• B. Оптическое вращение, удельное вращение<781S>
Раствор образца: 40 мг/мл в воде
Критерии приемки: от 15,5° до 17,5° при 20 ℃.
АНАЛИЗА
• Процедура
Образец: 500 мг предварительно высушенного глутатиона.
Титриметрическая система
(См. Титриметрия <541>.)
Режим: Прямое титрование
Титрант: 0,1 N йода VS.
Обнаружение конечных точек: визуальное
Холостое исследование: 50 мл метафосфорной кислоты (1 из 50).
Анализ: Растворите образец в 50 мл метафосфорной кислоты (1 из 50) и титруйте титрованием.
Рассчитайте процентное содержание глутатиона (C10H17N3O6S) в принятой порции глутатиона:
Результат = [(V B) × N × F × 100]/Вт
V = титрантный объем пробы (мл)
B = титрантный объем бланка (мл)
N = нормальность титранта (мг-экв/мл)
F = коэффициент эквивалентности, 307,32 мг/м-экв.
W = вес образца (мг)
Критерии приемки: 98,0%~101,0% в пересчете на высушенное вещество.
ПРИМЕСИ
Неорганические примеси
• Аммоний
Стандартный раствор: 10 мкг аммония из разбавленного раствора хлорида аммония.
Образец раствора: 50 мг глутатиона.
Анализ: Перенесите раствор образца и стандартный раствор в отдельные банки емкостью 25 мл, закрытые крышками, и растворите в 1 мл воды. Добавьте 0,30 г оксида магния. Закройте немедленно, поместив под крышки кусок серебряно-марганцевой бумаги площадью 5 мм, смоченный несколькими каплями воды. Перемешайте, избегая выступов жидкости, и дайте постоять при температуре 40°С в течение 30 мин.
Критерии приемки: Если серебряно-марганцевая бумага имеет серый цвет, то он не более интенсивный, чем стандартный (не более 200 частей на миллион).
• Мышьяк<211>: не более 2 частей на миллион.
• Хлорид и сульфат, Хлорид<221>: растворите 0,7 г воды, чтобы получить 15 мл. В растворе содержится не больше хлоридов, чем соответствует 0,20 мл 0,020 N соляной кислоты (не более 200 частей на миллион).
• Хлорид и сульфат, Сульфат 221: растворите 0,8 г в воде, чтобы получить 15 мл. В растворе содержится не больше сульфата, чем соответствует 0,25 мл 0,020 N серной кислоты (не более 300 частей на миллион).
• Тяжелые металлы, метод I<231>: не более 10 частей на миллион.
• Железо<241>: не более 10 частей на миллион.
• Остаток при возгорании<281>: не более 0,1%.
Органические примеси
• Процедура
Подвижная фаза: 6,8 г/л дигидрофосфата калия с 2,02 г/л 1-гептансульфоната натрия. Доведите pH фосфорной кислотой до 3,0. Смешайте 970 мл этого раствора с 30 мл метанола.
Раствор для проверки пригодности системы: 0,1 мг/мл USP 1 - Фенилаланин RS, 0,5 мг/мл USP Glutathione RS и 0,5 мг/мл USP Ascorbic acid RS в подвижной фазе.
Стандартный раствор: 0,01 мг/мл USP Glutathione RS в подвижной фазе. [Примечание. Концентрация этого раствора равна 2,0 % концентрации раствора образца. ]
Раствор образца: 50 мг глутатиона в 100 мл подвижной фазы. [Примечание: перед использованием дайте раствору постоять 5 минут. ]
Хроматографическая система
(См. «Хроматография<621>, Пригодность системы».)
Режим: ЛК
Детектор: УФ 210 нм
Колонка: 4,6-мм × 15-см; насадка 5-мкм L1
Температура колонки: 30
Скорость потока: отрегулируйте так, чтобы время удерживания глутатиона составляло около 5 минут.
Размер инъекции: 10 мкл
Пригодность системы
Пример: Решение по пригодности системы
Требования пригодности
Разрешение: не более 5,0 между пиками аскорбиновой кислоты и глутатиона; и NLT 5,0 между пиками глутатиона и l-фенилаланина.
Относительное стандартное отклонение: не более 1,5% для повторных инъекций.
Анализ
Образцы: стандартный раствор и образец раствора.
Рассчитайте процентное содержание примесей в принятой порции глутатиона:
Результат = (rU/rS) × (CS/CU) × 100
rU = пиковый отклик любого пика раствора образца, кроме глутатиона.
rS = пиковый отклик пика глутатиона из стандартного раствора.
CS = концентрация глутатиона RS согласно Фармакопее США в стандартном растворе (мг/мл).
CU = концентрация глутатиона в растворе образца (мг/мл).
Критерии приемки
Индивидуальная примесь: не более 1,5% для примеси с относительным временем удерживания около 4.
Общее количество примесей: не более 2,0%
СПЕЦИАЛЬНЫЕ ИСПЫТАНИЯ
• Прозрачность и цвет раствора.
Раствор образца: 0,1 г/мл в воде.
Анализ: В одинаковых пробирках из бесцветного, прозрачного, нейтрального стекла с плоским дном и внутренним диаметром 15-25 мм сравнивают исследуемую жидкость с водой, глубина слоя 40 мм. Сравните цвета при рассеянном дневном свете, рассматривая вертикально на белом фоне.
Критерии приемки: Раствор прозрачный и бесцветный.
• Потери при сушке<731>: не более 0,5%, 105℃ в течение 3 часов.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ
• Упаковка и хранение: Хранить в плотных контейнерах.
• Справочные стандарты Фармакопеи США<11>
USP Аскорбиновая кислота RS
USP Глутатион RS
USP l - Фенилаланин RS