Селенометионин
C5H11NO2Se 196.11
(S)-2-Амино-4-(метилселенил)масляная кислота [1464-42-2].
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Селенометионин содержит не более 97,0% и не более 103,0% селенометионина (C5H11NO2Se) и содержит не более 39,0% и не более 41,0% селена (Se), рассчитанного на основе «как есть».
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
• А. Инфракрасное поглощение<197K>
АНАЛИЗА
• Процедура
Подвижная фаза: 6,8 г/л одноосновного фосфата калия в воде. Доведите pH фосфорной кислотой до 2,75 ± 0,25.
Раствор для проверки пригодности системы: 0,16 мг/мл селенометионина RS USP и 0,8 мг/мл L-метионина RS USP в подвижной фазе.
Стандартный раствор: 0,16 мг/мл селенометионина RS USP в подвижной фазе.
Раствор образца: 0,16 мг/мл селенометионина в подвижной фазе при обработке ультразвуком. Пропускают через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.
Хроматографическая система
(См. «Хроматография<621>, Пригодность системы».)
Режим: ЛК
Детектор: УФ 220 нм
Колонка: 4,6-мм × 25-см; упаковка L1 с полярным концом - укупорка
Скорость потока: 1 мл/мин.
Размер инъекции: 20 мкл
Пригодность системы
Пример: Решение по пригодности системы
[Примечание-Относительное время удерживания метионина и селенометионина составляет 0,8 и 1,0 соответственно.]
Требования пригодности
Разрешение: NLT 3,0 между метионином и селенометионином.
Хвостовой коэффициент: NMT 2,0 для пика селенометионина.
Относительное стандартное отклонение: не более 2,0% для пика селенометионина.
Анализ
Образцы: стандартный раствор и образец раствора.
Рассчитайте процентное содержание селенометионина (C5H11NO2Se) в принятой порции селенометионина:
Результат = (rU/rS) × (CS/CU) × 100
rU= пиковый отклик раствора образца
rS= пиковый отклик стандартного раствора.
CS = концентрация селенометионина RS согласно Фармакопее США в стандартном растворе (мг/мл).
CU = концентрация селенометионина в растворе образца (мг/мл).
Критерии приемки: 97,0%-103,0% «как есть».
ПРИМЕСИ
• Тяжелые металлы, метод I<231>: не более 20 частей на миллион.
• Предел натрия
Стандартный исходный раствор: 10 мкг/мл натрия из хлорида натрия, предварительно высушенный при температуре 105°С в течение 2 часов.
Стандартные растворы: 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/мл натрия. Внесите пипеткой 2,0, 5,0 и 10,0 мл стандартного исходного раствора в отдельные мерные колбы емкостью 100 мл. В каждую колбу добавляют по 2,0 мл раствора хлорида калия (1 из 5) и 1,0 мл соляной кислоты и доводят водой до объема.
Раствор образца: перенесите 100 мг селенометионина в мерную колбу емкостью 100 мл, добавьте 2,0 мл раствора хлорида калия (1 из 5) и 1,0 мл соляной кислоты и разбавьте водой до объема.
Инструментальные условия
(См. Спектрофотометрия и Свет - Рассеяние <851>.)
Режим: атомно-абсорбционная спектрофотометрия
Аналитическая длина волны: 589 нм
Лампа: Натриевая полая - катод
Пламя: Воздух-ацетилен
Анализ
Образцы: стандартные решения и образец решения.
Определите оптическую плотность растворов. Постройте график зависимости поглощения стандартных растворов от их концентрации (мкг/мл натрия) и нарисуйте прямую линию, которая лучше всего соответствует нанесенным точкам. По полученному таким образом графику определите концентрацию натрия CNa (мкг/мл) в растворе пробы.
Рассчитайте процентное содержание натрия в принятой порции селенометионина:
Результат = (CNa/CSA) × F × 100
CNa = концентрация натрия в растворе пробы (мкг/мл), определенная по линии регрессии.
CSA = концентрация селенометионина в растворе образца (мг/мл).
F= коэффициент пересчета, 0,001 мг/мкг
Критерии приемки: не более 0,1%
• Хроматографическая чистота
Стандартный раствор А: перенесите 50 мг селенометионина RS USP в мерную колбу емкостью 10 мл, добавьте 2 мл воды, при необходимости нагрейте до растворения и разбавьте метанолом до нужного объема.
Стандартный раствор B: Перенесите 1,0 мл стандартного раствора A в мерную колбу емкостью 100 мл и разбавьте метанолом до нужного объема.
Раствор образца: перенесите 50 мг селенометионина в мерную колбу емкостью 10 мл, добавьте 2 мл воды, при необходимости нагрейте до растворения и разбавьте метанолом до нужного объема.
Хроматографическая система
(См. «Хроматография<621>, Пригодность системы».)
Режим: ТСХ
Абсорбент: слой хроматографической силикагелевой смеси толщиной 0,25 мм.
Объем применения: 10 мкл
Проявляющий растворитель: бутанол, ледяная уксусная кислота и вода (4:1:1).
Реагент для распыления: 2 мг/мл нингидрина в спирте.
Анализ
Образцы: стандартный раствор A, стандартный раствор B и образец раствора.
Действуйте согласно указаниям для хроматографии<621>, тонкослойной хроматографии. Дайте пятнам высохнуть и проявляйте хроматограмму в проявляющем растворителе до тех пор, пока фронт растворителя не переместится на три четверти длины пластинки. Выньте пластину из камеры проявления, отметьте переднюю часть растворителя и дайте растворителю испариться. Найдите пятна на пластине, распылив спрей-реагент и высушив его при температуре 110°С в течение 10 мин.
Критерии приемки: не более 1,0%. Значение RF основного пятна раствора образца соответствует значению RF стандартного раствора А; и ни одно пятно, кроме основного пятна раствора образца, не было бы больше или интенсивнее, чем основное пятно стандартного раствора B.
СПЕЦИАЛЬНЫЕ ИСПЫТАНИЯ
• Оптическое вращение, удельное вращение<781S>
Раствор образца: 10 мг/мл в 1 н. соляной кислоте.
Критерии приемки: от +17,0 до +19,5.
• Содержание селена
[Внимание - Селен токсичен; обращайтесь с ним осторожно.]
Стандартный исходный раствор: растворите 1 г металлического селена в минимальном объеме азотной кислоты. Выпарить досуха, добавить 2 мл воды и выпарить досуха. Повторите добавление воды и выпаривание досуха три раза. Растворяют остаток в 3 н. соляной кислоте, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят до объема 3 н. соляной кислотой. Этот раствор содержит 1000 мкг/мл селена.
Стандартные растворы: 20, 50 и 100 мкг/мл селена. Внесите пипеткой 2,0, 5,0 и 10,0 мл стандартного исходного раствора в отдельные мерные колбы емкостью 100 мл. Содержимое каждой колбы разбавьте водой до объема.
Раствор образца: 0,125 мг/мл селенометионина в воде.
Инструментальные условия
(См. Спектрофотометрия и Свет - Рассеяние <851>.)
Режим: атомно-абсорбционная спектрофотометрия
Аналитическая длина волны: 196 нм
Лампа: Полый селен - катод
Пламя: Воздух-ацетилен
Пустой: Вода
Анализ
Образцы: стандартные решения и образец решения.
Определите оптическую плотность растворов. Постройте график зависимости поглощения стандартных растворов от их концентрации (мкг/мл селена) и нарисуйте прямую линию, которая лучше всего соответствует нанесенным точкам. По полученному таким образом графику определите концентрацию селена CSe (мкг/мл) в растворе образца.
Рассчитайте процентное содержание селена в принятой порции селенометионина:
Результат = (CSe/CSA) × F × 100
CSe = концентрация селена в растворе образца (мкг/мл), определенная по линии регрессии.
CSA = концентрация селенометионина в растворе образца (мг/мл).
F= коэффициент пересчета, 0,001 мг/мкг
Критерии приемки: 39,0%-41,0% «как есть»
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ
• Упаковка и хранение: Хранить в хорошо закрытых контейнерах.
• Справочные стандарты Фармакопеи США<11>
USP L - Метионин RS
USP Селенометионин RS